Resimler görünmüyor kanka. Soruyla ilgili olarak ta sürekli yapılan transfer doğru bi hareket değil. Amacımız rizo yakalayıp sonra aşılamaya geçmek. Transfer işlemi esnasında hijyen protokolüne ne kadar dikkat ediyorsun mesela? SAB kullanıyor musun? Spor şırıngayı nasıl hazırlıyorsun? Bana kalırsa yaptığın işlemleri sırasıyla buraya yaz, yanlış varsa ortaya çıkar zaten kanka. Biz de elimizden geldikçe yardımcı oluruz elbet..
Ü
Üye silindi 30498
Guest
Petri kapları bu şekilde sağlıklı gösteriyor
ama kavanozlara aktardığımda sürekli küfle karşı karşıya kalıyorum
Dostum kontaminasyonun bir çok sebebi olabilir. Buna, "şu sebepten oluyor" demek çok mümkün değil. Fakat attığın petri kaplarında çok fazla tometoz yapı ve renk değişimleri var. Renk değişimlerinin bazı yerleri doku bozulması kaynaklı gibi görünüyor olsa da, bazı yerlerde kontaminasyon başlangıcı boy göstermiş.
Üstelik izolasyon yaparken gelişimin, petri kabının sınırlarına gelmemesine özen göstermelisin. Bu şekilde zamanlamasına dikkat etmediğin rizomorf gelişimlerin, tometoz yapı ile kaplanmasına sebep olursun ve tekrar sağlıklı rizo görmek için bu yöntem seni sürekli olarak izolasyon yapmaya zorlar. Kontaminasyonun tek sebebi olmasa da, petri kaplarındaki oluşum da sandığın kadar sağlıklı değil.
İzolasyon yaparken skalpel kullanıyorsan, transfer edeceğin dokuya çok zarar vermeden tek seferde cart diye kesebilmen gerekiyor örneğin. Bla bla gibi bir sürü detay var. @IcBlue da konuya ilişkin görüşlerini yazacaktır. Umarım gönlünce olur kankacım. Tüm bu aşamaları kendi araştırmaların ve tecrübelerin ile kat ettiğini düşünerek kötü bir konumda olmadığını düşünüyorum.
Maykıl haklı. İzolasyon aşamasını ne kadar arttırırsan, elindeki ürünün orijinal halinden o kadar uzaklaşmış olursun. Bu ürünün kalitesinden, etkilerine kadar bir çok şeyi değiştirebilir. Yani kısaca mutasyona sebep olabilirsin.
Evet SAB kullanıyorum malzemeleri çoğunlukla izopropil alkol ile steril ediyorum kontamine olan buğdayı 14 saat suda ıslattım 15 dk kaynattıktan sonra kavanozlara alıp 90 dk düdüklüde sterilize ettim sonrasında petri kaplarında ki miselleri neşter yardımı ile keserek kavanozlara aktarıp kapaklarını kapattım kapaklara 4 tane küçük delik açıp flester bant ile kapatmıştım petri kaplarında agar agar malt exract nutritionel yeast kullanıyorum petri kaplarının etraflarını parafilm ile kapatıyorum
IcBlue
Doktor
kavanoza parçadan transfer kontaminasyon ihtimalini hatrı sayılır şekilde arttırır, agardan şırınga yöntemlerini araştırmanı tavsiye ederim. bu şekilde airport kavanoz kullanıp şırıngayla enjekte edersen sterilize ettiğin hiçbir malzemeyi tekrar açmak zorunda kalmazsın. Skipperın da kullandığı sıvı kültür yöntemi buna güzel bir örnek. bol şans.
Şuan elimdeki agar kaplarındaki miseli sıvı kültüre dönüştürebilir miyim
Tabi ki.. Dikkat etmen gereken nokta agardan aldığın parçanın rizo yapılı misel olması ve çok ince işçilik çalışman gerektiği. Bi nevi biyopsi yapacaksın..
Ü
Üye silindi 30498
Guest
Evet yapılabilir. Ama şunu değerlendirmek gerekiyor; Şuan halihazırda petrilerinden aşılama yaptığı substrat kontamine oluyor. Petrilerindeki renk değişimlerinin kontamine olma ihtimalini de atlamamak gerekiyor bu durumda. Ben mevcut petrilerinde %100 sağlıklı rizo bir petri görene kadar tekrar izolasyon yapmanı öneriyorum sıvı kültüre aşılama yapmadan önce. Pek tabi şuana kadar yaptığın ve bundan sonra yapacağın izolasyon aşamaları, kalite ve tüketim açısından bir çok eksiğe sebep olmuş olabilir. Ama bu yolu hasat almak değil de eğitim olarak görürsen, bir daha sıfırdan başladığın zaman elinde çok sağlam kılavuz olur.
Mesela petrilerini delme işine son verebilirsin. Bu yöntemi hava alması için yapıyorsan, zaten kullandığın parafilm bant, kontaminasyon riskini çok çok aşağılara çekerek sana oksijen konsantrasyonu sağlıyor. Ve rizo göreceğin bir petriye kadar izolasyon yapmış olmanın yanında hala kontaminasyonu bir şekilde barındırıyor olman da hijyen protokolünde bir sorun olduğu anlamına gelir.
Bu durumda yapman gereken, çalışma şartlarının tümünde, kontaminasyona sebep olacak aşamaları tekrar değerlendirmen,
İzolasyon yaparken doku bozulmasına sebep olacak hareketini tespit etmen,
Steril çalışma şartlarının neler gerektirdiğini tekrar gözden geçirmen,
Ve son olarak sıvı kültürün nasıl yapıldığını öğrenmen.
Umarım gönlünce olur dostum. (Y)
Mesela petrilerini delme işine son verebilirsin. Bu yöntemi hava alması için yapıyorsan, zaten kullandığın parafilm bant, kontaminasyon riskini çok çok aşağılara çekerek sana oksijen konsantrasyonu sağlıyor. Ve rizo göreceğin bir petriye kadar izolasyon yapmış olmanın yanında hala kontaminasyonu bir şekilde barındırıyor olman da hijyen protokolünde bir sorun olduğu anlamına gelir.
Bu durumda yapman gereken, çalışma şartlarının tümünde, kontaminasyona sebep olacak aşamaları tekrar değerlendirmen,
İzolasyon yaparken doku bozulmasına sebep olacak hareketini tespit etmen,
Steril çalışma şartlarının neler gerektirdiğini tekrar gözden geçirmen,
Ve son olarak sıvı kültürün nasıl yapıldığını öğrenmen.
Umarım gönlünce olur dostum. (Y)
Ü
Üye silindi 30498
Guest
Moral bozacak bir şey yok dostum. Bu yol en başından başladığın zaman mikrobiyolojik bilgiler gerektiren bir yol. Ve sen kendi kendine güzel bir yerlere gelmişsin zaten. Bu bir başarıdır. Sadece pes etmeyip devam edersen başaracaksın. Sıvı kültür için YouTube üzerinden falan bir kaç video bakabilirsin. Agar ile aynı mantığa sahip aslında. Sadece agardan daha düşük bir besin oranına sahip. Malzemeleri falan da neredeyse aynı (Agar hariç)
Yukarıdaki yazımda kapağına falan örnek de gösterdim. Şırınga örneği vs de mevcut. Bir göz gezdir istersen.
Lew4nd0w5k1
Üye
Lew4nd0w5k1
Üye
bu arada bende golden teacher cambodian ve albino penis envy ile başladım
IcBlue
Doktor
kolonizasyon sıcaklık, genetik, aşılama yöntemi gibi çok farklı sebeplere bağlı olarak sürede değişkenlik gösterir. uygun şartlarda ilk gelişimi gözlemlediğin andan itibaren 2 hafta içinde çoğunlukla yeterli kolonizasyona ulaşılır, tabi bu sadece kaba bir genelleme. petrilerini ortalama 24 derecede muhafaza edersen çoğu tür için ideal gelişim hızını yakalaman mümkün.
miselin petrinin kenarlarına ulaşmasını beklememek gerekir. kenarlara temas eden misel kontaminasyona daha açık hale gelir, daha uzun süreler kendi haline bırakıldığında parafilm boyunca büyümeye devam da edebilir, bir yerden sonra besin kaynakları tükenmeye başladığından rengi koyulaşarak kaliteden harcamaya başlar ve sonunda ölür. bir sonraki adıma geçmeden önce petrinin en az 3/4ünün kolonize olması genel kabul görmüş kuraldır. bu sayede aşırı büyümenin önüne geçerken misele yeterince gelişip güçlenecek zaman da tanınmış olur.
gelelim zurnanın zırt dediği yere, burda biraz niyet okumuş olacağım kusura bakmazsın umuyorum. gelişim süresini sorduğuna göre henüz ilk petride olduğunu varsayıyorum, bu petrilerde gelişim gözlemleyince substrata aşılamayı düşünüyorsan agara aşılama yapmış olmanın hiçbir anlamı olmayacaktır. agar yönteminin ilk amacı izolasyondur, bu adımı birkaç kere transfer yaparak sürdürür ve miselini kontaminasyonlardan ve farklı tip suşlardan arındırırsın. tabi sonrası için önceden hazırlık olsun diye sorduysan o ayrı
umarım gönlünce olsun, bol şans.
Ü
Üye silindi 30498
Guest
Lew4nd0w5k1
Üye
Ü
Üye silindi 35015
Guest
Güzel çalışma merakla takipteyim
merakla takipteyim
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
A Anm1919:*** ***** *** ******* ** ****** ****** ***** ***** **** ***** ***** ********* ****** ****** ****** **********
-
Emmy:
***** ** **** **** **** ***** ******** ***** ***** hahahaha*** **** ***** ******* ******** ****** ***** ***** *** ***** ***** ***** ****** ***+1 -
A Anm1919:****** *** **** *** ******* **** * **** ******** ***** **** ******* ***** ********** ** **** * ***** **** ******** hahahaha**
-
-
-
-
kawinnnz:
** ******* hahahaha ***** **** ******* ** ********* ** ***** ***** ** ***** *** ********* **** ********** **+1 -
-
